I test sierologici: tipologie, l'uso

diagnosi di laboratorio di praticamente tutte le malattie infettive si basa sul rilevamento di sangue di anticorpi del paziente, che sono prodotte dal patogeno antigene, metodi sierologici. Entrarono in pratica medica alla fine del XIX – inizi del XX secolo.

Lo sviluppo della scienza ha contribuito a definire la struttura antigenica dei microbi e formule chimiche delle loro tossine. E 'possibile creare il siero non solo terapeutica, ma anche diagnostico. Sono ottenuti somministrando patogeni attenuati animali da laboratorio. Dopo diversi giorni di immersione conigli o topi sangue prodotti utilizzati per l'identificazione di batteri o loro tossine utilizzando test sierologici preparati.

La manifestazione esteriore di questa reazione dipende dalle condizioni della sua formulazione e lo stato di antigeni nel sangue del paziente. Se microbi sono particelle insolubili, si depositano, lisati, immobilizzato o legati nel siero. Se gli antigeni sono solubili, sembra che il fenomeno di neutralizzazione o precipitazione.

agglutinazione (PA)

test di agglutinazione sierologica è altamente specifico. E 'facile da eseguire ed è abbastanza chiaro per rilevare rapidamente la presenza di antigeni nel siero del paziente. Viene utilizzato per la reazione di Vidal (diagnosi di tifo e paratifo) e Weigl (tifo).

Si basa su una specifica interazione tra anticorpi umani (o agglutinine) e le cellule microbiche (agglyutenogenami). A seguito della loro interazione sono formate particelle che precipitano. Questo è un segno positivo. Per impostare reazione possono essere utilizzati agenti microbici vivi o morti, funghi, protozoi, cellule del sangue e cellule somatiche.

reazione chimica è diviso in due fasi:

1. anticorpi specifici composto (AT) con antigeni (Ag).
2. Non specifico – la deposizione di conglomerati AG-AT, cioè la formazione del agglutinate.

Reazione di agglutinazione indiretta (TPHA)

Questa reazione è più sensibile rispetto a quella precedente. Viene utilizzato per la diagnosi di malattie causate da batteri, parassiti intracellulari, protozoi. È così specifico che può rilevare anche molto basse concentrazioni di anticorpi.

Per la sua formulazione con globuli rossi di pecora purificato e globuli rossi di umana pretrattate con anticorpi o antigeni (dipende da cosa laboratorio vuole trovare). In alcuni casi, i globuli rossi umani trattati con immunoglobuline. risposta sierologica di eritrociti è considerato valido se precipitazioni loro avvenuto al fondo della provetta. La reazione positiva si può dire quando le celle sono disposte a forma di un ombrello rovesciato, che occupa tutto il fondo. La reazione negativa è ottenuto quando i globuli rossi si depositano sotto forma di una colonna o pulsanti nel centro del fondo.

reazione di precipitazione (RP)

reazioni sierologiche di questo tipo servono a identificare particelle estremamente piccole antigeni. Questo può essere, per esempio, proteine (o loro porzioni), composti di proteine con lipidi o carboidrati, parte dei batteri e le loro tossine.

Sieri per la reazione si ottiene infestazione artificiale degli animali, tipicamente conigli. In questo metodo, è possibile ottenere assolutamente qualsiasi siero precipitante. Staging sierologica precipitazione simile meccanismo di azione sulla agglutinazione. Gli anticorpi contenuti nel siero si legano agli antigeni in soluzione colloidale per formare grandi molecole proteiche, che si depositano sul fondo del tubo o sul substrato (gel). Questo metodo è considerato altamente specifico e può rilevare anche tracce di sostanza.

Utilizzati per diagnosticare la peste, tularemia, l'antrace, la meningite e altre malattie. Anche coinvolti in sede di esame forense.

Test di precipitazione Gel

test sierologici possono essere eseguite non solo in un mezzo liquido, ma nel gel di agarosio. Questo è chiamato metodo di precipitazione diffusa. Con esso, studiare la composizione delle miscele complesse antigeniche. Questo metodo si basa sulla chemiotassi di antigeni di anticorpi, e viceversa. Il gel si muovono verso l'altro a velocità diverse e riunione per formare linee di precipitazione. Ogni linea – un set di K-AT.

La neutralizzazione esotossina antitoxin (RN)

siero antitoxic può neutralizzare esotossina che microrganismi producono. Sulla base di questi dati e test sierologici. Microbiologia utilizza questo metodo per la titolazione dei sieri, tossine e tossoidi, così come la loro attività terapeutica. La forza della neutralizzazione della tossina è determinata dalle unità convenzionali – AE.

Inoltre, a causa di questa reazione può determinare la specie o tipi appartenenti esotossina. E 'utilizzato nella diagnosi di tetano, la difterite, il botulismo. Lo studio può essere effettuata "a bicchiere", e in un gel.

reazione di lisi (RL)

Il siero immune, che entra nel corpo del paziente, presenta, oltre alla sua funzione principale di immunità passiva, anche e proprietà litici. È in grado di sciogliere agenti microbici, elementi cellulari ed esteri virus di entrare nel corpo del paziente. A seconda della specificità degli anticorpi inclusi nel siero isolato bactericidin, citolisina, spirohetoliziny, hemolysins e altri.

Questi anticorpi specifici sono chiamati "complemento". Si trova in quasi tutti i fluidi corporei, ha una struttura proteica complessa ed è molto sensibile all'aumento di temperatura, scosso, acidi e luce solare diretta. Ma nello stato essiccato è in grado di mantenere le loro proprietà litiche di fino a sei mesi.

Ci sono alcuni tipi di test sierologici di questo tipo:

– bacteriolysis;

– emolisi.

Bacteriolysis viene effettuata utilizzando siero del sangue del paziente e siero specifico immunitario con i germi dal vivo. Se poi il ricercatore vede la lisi dei batteri, e la risposta sarà considerato è presente nel sangue un numero sufficiente di complemento positivo.

La seconda risposta sierologica sangue è che la sospensione di eritrociti trattati siero contenente hemolysins paziente, che vengono attivati solo in presenza di un particolare complimento. Se c'è uno, poi il laboratorio a guardare la dissoluzione dei globuli rossi. Questa reazione è ampiamente usato nella medicina moderna per determinare il titolo di complemento (vale a dire, la sua più piccola quantità che provoca la lisi dei globuli rossi) nel siero del sangue e per la produzione del complemento analisi di legame. E 'stato in questo modo condotto reazione sierologica per la sifilide – Wasserman.

fissazione del complemento (RSK)

Questa reazione viene utilizzato per rilevare anticorpi sierici al paziente di un agente infettivo, nonché per identificare il mittente della sua struttura antigenica.

Fino a questo punto abbiamo descritto un semplice test sierologici. RAC considerato reazione difficile, dal momento che interagiscono non due, ma tre elementi: un anticorpo, un antigene e complemento. La sua essenza sta nel fatto che l'interazione tra l'anticorpo e l'antigene si verifica solo in presenza di proteine complimenteranno che vengono adsorbiti sulla superficie del complesso formato K-AT.

Stessi antigeni dopo l'aggiunta del complemento, soggetto a modifiche sostanziali, che indicano la qualità della reazione. Questo può essere lisi, emolisi, immobilizzazione, battericida o batteriostatica effetto.

La reazione stessa avviene in due fasi:

1. La formazione di anticorpo-antigene, che non è visivamente evidente ricercatore.
2. Cambiare l'antigene sotto l'azione di complemento. Questa fase di solito può essere fatta ad occhio nudo. Se la risposta visiva non è visibile, quindi utilizzare il sistema ulteriore indicatore che permette di rilevare i cambiamenti.

sistema di indicatori

Questa reazione si basa sul legame di complemento. Il provette ore dopo l'impostazione RSK aggiunto eritrociti di pecora purificati e emolitica siero non contenente complemento. Se il tubo è stato lasciato complemento non legato, si unirà il complesso N-AT formata tra i globuli ovini e emolisina, e causare loro dissoluzione. Ciò significa che il DGC è negativo. Se i globuli rossi sono rimasti intatti, quindi, di conseguenza, la reazione è positiva.

hemagglutination (RHA)

Ci sono due fondamentalmente diversi emoagglutinazione. Uno di loro – sierologica, è utilizzato per la determinazione dei gruppi sanguigni. In questo caso eritrociti interagire con anticorpi.

E la seconda reazione non è correlata a sierologico, poiché i globuli rossi reagiscono con emoagglutinina prodotto da virus. Dal momento che ogni eccitatore agisce solo su eritrociti specifici (pollo, pecore, scimmia), possiamo assumere questa reazione strettamente specifico.

risposta positiva o negativa chiaro, è possibile che la posizione delle cellule del sangue nel fondo della provetta. Se essi figura assomiglia ad un ombrello rovesciato, allora il virus desiderato è presente nel sangue del paziente. E se tutti i globuli rossi formano come un colonne della moneta, non ci sono agenti patogeni sconosciuti.

La reazione di inibizione emoagglutinazione (HAI)

Questa reazione altamente specifica, che consente di stabilire la forma, tipo di virus o la presenza di anticorpi specifici nel siero del sangue del paziente.

La sua essenza sta nel fatto che gli anticorpi aggiunti alla provetta contenente il materiale di prova, impedisce la deposizione di antigeni sugli eritrociti, arrestando così emoagglutinazione. Questa è un'indicazione qualitativa della presenza di antigeni specifici nel sangue a un particolare virus desiderato.

Reazione di immunofluorescenza (RIF)

La reazione è basata sulla capacità di identificare complessi con microscopia a fluorescenza AT-AH dopo coloranti trattamento flyuorohromnymi. Questo metodo è semplice da usare, non richiede l'isolamento di coltura pura e richiede poco tempo. È indispensabile per la diagnosi rapida delle malattie infettive.

In pratica, questi test sierologici sono divisi in due categorie: diretti e indiretti.

RIF continua prodotta antigene trasformate in precedenza siero fluorescente. E indiretta è che il farmaco viene prima trattato con Diagnostico convenzionale comprendente anticorpi contro l'antigene desiderato e poi riapplicato siero fluorescente, che è specifico per le proteine del complesso K-AT, e cellule microbiche diventano visibili al microscopio.